培養基配制方法和注意事項 培養基的配制原則有哪些

一、培養基配制方法

培養基是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料，一般是根據配方配制而成的，配方沒有特殊要求的話，一般培養基的配制方法步驟如下：

1、配料

配方換算→在容器中加入少量水（蒸餾水，自然水）→按照配方稱取各種藥品（依次加入）→加足所需水量（一藥一勺，取藥后立即蓋上瓶蓋）。

2、溶解

淀粉溶解：少量冷水調成糊狀。

加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃ ，且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。

3、調PH

用1N的鹽酸或1N的 NaOH把培養基調節到所要求的值。

4、過濾

濾紙或棉花進行過濾。（有時可以省去）

5、分裝

一般培養基放在三角瓶或試管中滅菌使用。

（1）三角瓶

若作靜置培養，則100ml培養基/250ml的三角瓶，最多不能超過150ml培養基/250ml的三角瓶，否則滅菌時培養基沸騰容易污染棉塞，造成染菌；若作搖瓶培養，則15-20ml培養基/250ml的三角瓶，保證通氣良好。

（2）試管分裝

液體培養基一般裝4-5ml，約試管的1/4高度；固體斜面培養基一般裝3-4ml，約試管的1/5高度。

6、包扎

分裝好后，塞上棉塞，在用牛皮紙將棉塞包裹好，防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。

7、滅菌

按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高，營養成分會被破壞，培養基中的糖、氨基酸會使培養基的顏色變深。

8、擺斜面

滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放，使其凝固成為一個斜面，約占試管長度的1/2。

9、貯存

培養基在30℃下放置一天，無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。

二、培養基配制注意事項

1、分裝好的培養基應當天進行滅菌處理（2小時內滅菌最佳），分裝的量不宜超過容器的2/3以免滅菌時外溢。

2、實驗室采用濕熱滅菌對培養基進行滅菌處理，按照培養基使用說明采用合適的滅菌溫度和時間。尤其含糖量較高的培養基溫度不應太高，過高會導致糖分焦化，影響質量。

3、每次制備培養基均應有配制記錄，記錄應復制一份，原記錄保存備查，復制記錄隨制好的培養基一同存放、以防發生混亂。

4、培養基應存放于冷暗處，最好放于普通冰箱內。放置時間不宜超過一周，傾注的平板培養基不宜超過3天。每批培養基均必須附有該批培養基制備記錄副頁或明顯標簽。

三、培養基的配制原則有哪些

培養基的配制除了要注意正確的方法以及一些注意事項外，還要注意遵循以下幾個原則：

1、選擇適宜的營養物質

總體而言，所有微生物生長繁殖均需要培養基含有碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水及能源，但由于微生物營養類型復雜，不同微生物對營養物質的需求是不一樣的，因此首先要根據不同微生物的營養需求配制針對性強的培養基。

就微生物主要類型而言，有細菌、放線菌、酵母菌、霉菌、原生動物、藻類及病毒之分，培養它們所需的培養基各不相同。在實驗室中常用牛肉膏蛋白胨培養基（或簡稱普通肉湯培養基）培養細菌，用高氏I號合成培養基培養放線菌，培養酵母菌一般用麥芽汁培養基，培養霉菌則一般用查氏合成培養基。

2、營養物質濃度及配比合適

培養基中營養物質濃度合適時微生物才能生長良好，營養物質濃度過低時不能滿足微生物正常生長所需，濃度過高時則可能對微生物生長起抑制作用。另外，培養基中各營養物質之間的濃度配比也直接影響微生物的生長繁殖和（或）代謝產物的形成和積累，其中碳氮比（C/N）的影響較大。嚴格地講，碳氮比指培養基中碳元素與氮元素的物質的量比值，有時也指培養基中還原糖與粗蛋白之比。

3、控制pH條件

培養基的pH必須控制在一定的范圍內，以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產生代謝產物。各類微生物生長繁殖或產生代謝產物的最適pH條件各不相同，一般來講，細菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內生長，酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內生長。值得注意的是，在微生物生長繁殖和代謝過程中，由于營養物質被分解利用和代謝產物的形成與積累，會導致培養基pH發生變化，若不對培養基pH條件進行控制，往往導致微生物生長速度下降或（和）代謝產物產量下降。因此，為了維持培養基pH的相對恒定，通常在培養基中加入pH緩沖劑。

4、控制氧化還原電位

不同類型微生物生長對氧化還原電位（F）的要求不一樣，一般好氧性微生物在F值為 0.1V以上時可正常生長，一般以 0.3— 0.4V為宜，厭氧性微生物只能在F值低于 0.1V條件下生長，兼性厭氧微生物在F值為 0.1V以上時進行好氧呼吸，在 0.1V以下時進行發酵。F值與氧分壓和pH有關，也受某些微生物代謝產物的影響。在pH相對穩定的條件下，可通過增加通氣量（如振蕩培養、攪拌）提高培養基的氧分壓，或加入氧化劑，從而增加F值；在培養基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等還原性物質可降低F值。

5、原料來源的選擇

在配制培養基時，應盡量利用廉價且易于獲得的原料作為培養基成分，特別是在發酵工業中，培養基用量很大，利用低成本的原料更體現出其經濟價值。例如，在微生物單細胞蛋白的工業生產過程中，常常利用糖蜜（制糖工業中含有蔗糖的廢液）、乳清（乳制品工業中含有乳糖的廢液）、豆制品工業廢液及黑廢液（造紙工業中含有戊糖和己糖的亞硫酸紙漿）等都可作為培養基的原料。再如，工業上的甲烷發酵主要利用廢水、廢渣作原料，而在我國農村，已推廣利用人畜糞便及禾草為原料發酵生產甲烷作為燃料。另外，大量的農副產品或制品，如鼓皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花生餅、蛋白胨等都是常用的發酵工業原料。

6、滅菌處理

要獲得微生物純培養，必須避免雜菌污染，因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養基而言，更是要進行嚴格的滅菌。對培養基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養基用1.05kg/cm²，121.3℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過程中，長時間高溫會使某些不耐熱物質遭到破壞，如使糖類物質形成氨基糖、焦糖，因此含糖培養基常在0.56kg/cm2，112.6℃15-30分鐘進行滅菌，某些對糖類要求較高的培養基，可先將糖進行過濾除菌或間歇滅菌，再與其他已滅菌的成分混合；長時間高溫還會引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽離子（特別是鈣、鎂、鐵離子）結合形成難溶性復合物而產生沉淀，因此，在配制用于觀察和定量測定微生物生長狀況的合成培養基時，常需在培養基中加入少量螯合劑，避免培養基中產生沉淀，常用的螯合劑為乙二胺四乙酸（EDTA）。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進行滅菌，然后再混合，避免形成沉淀；高壓蒸汽滅菌后，培養基pH會發生改變（一般使pH降低），可根據所培養微生物的要求，在培養基滅菌前后加以調整。

在配制培養基過程中，泡沫的存在對滅菌處理極不利，因為泡沫中的空氣形成隔熱層，使泡沫中微生物難以被殺死。因而有時需要在培養基中加入消泡沫劑以減少泡沫的產生，或適當提高滅菌溫度。